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1. PBS缓冲液（pH7.2～7.4）： NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L。
2. 0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。
3. 0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA?2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。
4. 1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0, 加水至1000ml。
5. 酶消化液：
   1. 0.1% 胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。
   2. 0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。
6. 3% 甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
7. 封片剂：
   1. 甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9.0～9.5）等量混合；
   2. 油和TBS(或PBS)配制。
8. TBS/PBS pH9.0～9.5，适用于荧光显微镜标本；pH7.0～7.4适合于光学显微镜标本。

1. 免疫组织化学染色
2. SP法：
   1. 脱蜡、水化：
      脱蜡前，应将切片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。
      1. 切片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟；
      2. 无水乙醇中浸泡5分钟；
      3. 95%乙醇中浸泡5分钟；
      4. 70%乙醇中浸泡5分钟；
   2. PBS洗2～3次各5分钟；
   3. 3%H2O2（80%甲醇）滴加在切片上，室温静置10分钟；
   4. PBS洗2～3次各5分钟；
   5. 抗原修复：（用于 福尔马林固定的石蜡包埋组织切片）
      1. 抗原热修复
         1. 高压热修复 在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）。盖上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。
         2. 煮沸热修复 电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入切片加热10~15分钟。
         3. 微波热修复 在微波炉里加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至沸腾后将切片放入，断电，间隔5~10分钟，反复1-2次。适用的抗原有： AR， Bax， Bcl-2， C-fos，X-jun，C-kit，C-myc，E-cadherin，Chromogranin A，Cyclin，ER，Heat shock protein，HPV，Ki-67，MDMZ，p53，p34，p16，p15，P-glycoprotein，PKC，PR，PCNA，ras，Rb，TopoismeraseⅡ等。
      2. 酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至37℃，切片也预热至37℃，消化时间约为5~30分钟；胃蛋白酶消化37℃时间为30分钟。适用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen，Complement，Cytokeratin，C-erB-2，GFAP，LCA，LN等。
   6. PBS洗2～3次各5分钟；
   7. 滴加正常 山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。
   8. 滴加一抗50μl，室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。
   9. 4℃过夜后需在37℃复温45分钟。
   10. PBS洗3次各5分钟；
   11. 滴加二抗40～50μl，室温静置，或37℃1小时；
   12. 二抗中可加入0.05%的tween-20；
   13. PBS洗3次各5分钟；
   14. DAB显色5～10分钟，在显微镜下掌握染色程度；
   15. PBS或自来水冲洗10分钟；
   16. 苏木精复染2分钟，盐酸酒精分化；
   17. 自来水冲洗10～15分钟；
   18. 脱水、透明、封片、镜检。
3. SABC法:
   1. 脱蜡、水化；
   2. PBS洗两次各5分钟；
   3. 用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭5～10分钟，蒸馏水洗3次；
   4. 抗原修复；
   5. PBS洗5分钟；
   6. 滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体；
   7. 滴加一抗,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45分钟）
   8. PBS洗三次每次2分钟；
   9. 滴加 生物素化二抗,20℃～37℃20分钟；
   10. PBC洗3次每次2分钟；
   11. 滴加试剂SABC，20℃～37℃20分钟；
   12. PBS洗4次每次5分钟；
   13. DAB显色：DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）；
   14. 蒸馏水洗。苏木素复染2分钟、盐酸酒精分化；
   15. 脱水、透明、封片、镜检。

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• 如何选择二抗