抗体有效期/怎样储存抗体
王秀英 (mary at labome dot com)
美国新泽西州普林斯顿合原研究有限责任公司 (Synatom Research)
译者
王秀英 (mary at labome dot com)
美国新泽西州普林斯顿合原研究有限责任公司 (Synatom Research)
DOI
http://dx.doi.org/10.13070/mm.cn.2.120
日期
更新 : 2014-11-13; 原始版 : 2012-10-12
引用
实验材料和方法 2012;2:120
摘要

有关存储抗体和抗体保质期的全方位讨论。

英文摘要

A thorough discussion about antibody storage and antibody shelf life.

抗体由于性质和所使用的储存条件不同,其存储的“保质期”可能从几周到几年不等。一些诊断性抗体被证明经过12-26年在4°C的储存能保持其功能 [1] 。每个抗体存储的最佳条件是独特的,然而我们还是可以总结抗体存储的一些建议和一般准则。抗体的储存时间取决于抗体固有的性质和储存条件。抗体(尤其是酶)必须存放在适当的温度和pH值范围。为了维持蛋白质的活性,以及防止其聚集,经常保存在一定浓度的甘油,蔗糖,或类似的物质里面。表一总结了抗体储存的一般准则以及其他的注意事项。

水, 4°C25-50%的甘油或乙二醇,-20°C冻结在-20 - 80°C或在液氮冻干
典型的保质期1个月1年内多年多年
抗体浓度1-5 mg/ml1-5 mg/ml1-5 mg/ml1-5 mg/ml
稀释载体蛋白BSABSABSA没有
消毒或抗菌的要求没有没有
抗氧化剂2-ME, DTT12-ME, DTT1没有没有
荧光共轭避光保存避光保存避光保存避光保存
pH值7.2-7.67.2-7.6
金属螯合剂EDTAEDTA
表一:抗体贮存条件。 1也可用蛋氨酸。
储存条件
实验室设备
冰箱

不要用没有霜冻的冰箱来储存需要零度以下保存的抗体。一般的家用冰箱是没有霜冻的,而且它们通过反复的自动解冻来防止霜冻的形成, 因此不可用一般的家用冰箱。

储存容器

带有标记的抗体应该储存在黑色瓶子里或者用锡箔纸包住瓶子。

温度

一般来说,抗体最好存放在≤4℃的清洁,灭菌的玻璃或塑料管。贮存在室温下通常会由于微生物的生长导致抗体退化和/或失活。抗体储存液放在4℃环境中1天或者几周内其活性不会受到明显影响。另外,抗体中可以加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。通常我们为了避免反复冻融,可以分装抗体。还可以加入抗微生物药物(如叠氮化钠或硫柳汞)以避免微生物的生长。

抗体有效期/怎样储存抗体 图 1
图 1. 叠氮化钠在不同浓度下抑制的革兰氏阴性细菌的生长。来自[16560767]。
抗冻剂:甘油和乙二醇

冰晶的形成能够破坏蛋白质的结构,因此导致抗体失效。甘油或乙二醇等防冻剂可以防止水分子之间氢键的形成,加入到溶液中可以降低其的凝点。所以,溶液的凝点取决于抗冻剂的组成和浓度。具体的凝点见表二。

102030405060708090100
甘油-2-5-10-16-22-34-38-19-217
乙二醇-4-7-15-23-34-48-51-45-29-12
表二:甘油和乙二醇在水中不同浓度(百分比%)的凝固点(摄氏度)。

注意: 乙二醇是有毒性的,使用的时候一定要注意安全。

当储存温度低于抗体溶液真实的凝点的时候,抗体溶液就会凝固。但是,这个时候并不会形成冰晶,而是发生了玻璃化作用,其可以保持抗体结果完整性。

为了增加抗体的稳定性,可以向抗体中加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。通常为了避免反复冻融,可以分装抗体。

因为普通甘油中含有微生物污染,所以使用无菌的甘油显得尤为重要。

储存和运输的干冰使用

最近的研究表明蛋白的储存和运输常用的干冰可引起存储液的酸化, 最终导致蛋白聚集或沉淀 [2] 。 这个问题在酸性蛋白(这些蛋白在pH小于7)上更明显。多克隆IgG抗体倾向于呈酸性,pH为4.7-7.5 [3] 。因此,蛋白和抗体必需储存在气密封的小瓶和/或气密封的塑料袋里,以尽量减少干冰酸化的问题。

灭菌和杀菌剂

抗体制剂应通过使用0.45微米的过滤器过滤和消毒的,并且其必须进行无菌处理,以防止微生物污染。

抗微生物药物,如终浓度为0.02-0.05%(W/V)的叠氮化钠(NaN3)或终浓度为0.01%(W/V)的硫柳汞可以抑制微生物的生长。

抗体有效期/怎样储存抗体 图 2
图 2. 叠氮化钠未能抑制革兰氏阳性细菌的生长。来自[16560767]。

叠氮化钠对于大多数细胞和组织是有毒的 [4] 。但是,叠氮化钠对革兰氏阳性菌(链球菌,肺炎球菌,乳酸杆菌)没有很大的毒性(参见图二) [5-7] 。 在叠氮化钠溶液中抗体不应该被直接用在活细胞中,或体内的研究。此外,叠氮化钠干扰大多数共轭反应。叠氮化钠可以通过凝胶过滤或透析清除。

蛋白酶抑制剂

蛋白酶抑制剂可以防止蛋白质水解。由于腹水和血清制试中都含有蛋白酶,所以储存这类抗体和制剂的时候加入蛋白酶抑制剂尤为重要。冷藏和/或加入蛋白酶抑制剂可用于防止这种降解。

抗体浓度

抗体浓度过低(<1毫克/毫升)更容易发生抗体的失活以及增加物理吸附造成的损失。因此,我们都要尽量的保持抗体在储存期间的高浓度,例如,1-5毫克/毫升。通常的做法是添加“载体”蛋白质,如纯化牛血清白蛋白(BSA)以防止这种降解和损失。

多克隆抗体

多克隆抗体在血清中于-20℃保存十年其活性损失不大。然而,一旦抗体被纯化后,储存在50%的甘油中于-20℃保存,即使没有冻融,其活性的损失也可以观察到,尽管其进程仍然非常缓慢。即使没有甘油,只要你不反复冻融,抗体也可以存储在-20℃几年甚至几十年。另一个重要的事情是,该抗体浓度应高于1毫克/毫升,因为稀的抗体容易失去活性而且容易造成物理吸附导致的损失。

单克隆抗体

单克隆抗体可以保存在50%的甘油存放于-20℃。也可以将其保存在饱和硫酸铵于4℃或-20℃保存。多年未见有失活、细菌滋生以及氧化。而冻干法(冷冻干燥,干燥或从冰冻状态)为一些冰冻以后不稳定抗体提供了一种替代的保存方法。在大多数情况下,冻干的抗体最好是存放在-20℃。虽然冷冻干燥有许多优点,它需要昂贵的设备和劳动力。

带标记的抗体

带标记的抗体一般储存在黑色容器中或者用锡箔纸盖住。

酶标记抗体

碱性磷酸酶和其他酶结合物对于冷冻特别敏感,一般应在4°C短期存储。

标记抗体长期保存最好是在终浓度为50%的甘油或乙二醇中于-20°C保存。虽然某些酶结合物可在无保护剂的情况下于-20°C储存,但必须分装,以防止反复冻融。

荧光标记抗体

荧光遇光容易分解,荧光标记的试剂(不只是抗体)必须避光保存,其应该存放在4°C、避免让其凝固。

参考文献
  1. Argentieri M, Pilla D, Vanzati A, Lonardi S, Facchetti F, Doglioni C, et al. Antibodies are forever: a study using 12-26-year-old expired antibodies. Histopathology. 2013;63:869-76 pubmed publisher
  2. Murphy B, Swarts S, Mueller B, van der Geer P, Manning M, Fitchmun M. Protein instability following transport or storage on dry ice. Nat Methods. 2013;10:278-9 pubmed publisher
  3. Szenczi A, Kardos J, Medgyesi G, Zavodszky P. The effect of solvent environment on the conformation and stability of human polyclonal IgG in solution. Biologicals. 2006;34:5-14 pubmed
  4. Chang S, Lamm S. Human health effects of sodium azide exposure: a literature review and analysis. Int J Toxicol. 2003;22:175-86 pubmed
  5. Lichstein H, Soule M. Studies of the Effect of Sodium Azide on Microbic Growth and Respiration: I. The Action of Sodium Azide on Microbic Growth. J Bacteriol. 1944;47:221-30 pubmed
  6. Lichstein H, Soule M. Studies of the Effect of Sodium Azide on Microbic Growth and Respiration: II. The Action of Sodium Azide on Bacterial Catalase. J Bacteriol. 1944;47:231-8 pubmed
  7. Lichstein H. Studies of the Effect of Sodium Azide on Microbic Growth and Respiration: III. The Effect of Sodium Azide on the Gas Metabolism of B. subtilis and P. aeruginosa and the Influence of Pyocyanine on the Gas Exchange of a Pyocyanine-Free Strain of P. aerugino. J Bacteriol. 1944;47:239-51 pubmed
ISSN : 2329-5147