兔源抗体
王秀英 (mary at labome dot com)
美国新泽西州普林斯顿合原研究有限责任公司 (Synatom Research)
译者
王秀英 (mary at labome dot com)
美国新泽西州普林斯顿合原研究有限责任公司 (Synatom Research)
DOI
http://dx.doi.org/10.13070/mm.cn.3.153
日期
更新 : 2014-12-10; 原始版 : 2013-02-16
引用
实验材料和方法 2013;3:153
英文摘要

This article addresses many questions related to rabbit monoclonal and polyclonal antibodies, unique rabbit antibody isotypes, antibody molecular weight, and antirabbit secondary antibodies.

兔IgG只有一种亚型

人和小鼠都有五种抗体类型 (IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM)。 目前为止,已经在兔中发现其中的四种 (IgA, IgE, IgG, and IgM)。 有趣的是,人有两种IgA亚型, 小鼠有一种, 而兔子共有14种IgA亚型。 想了解更多关于抗体类型,亚型,重链和轻链,不同物种的抗体类型组成,及抗体的恒定区和可变区等信息,请参考Labome文章 小鼠抗体

研究用的抗体主要是IgG类型。 兔只有一种IgG亚型,而小鼠有IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c和IgG3亚型,大鼠有IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c亚型。 表一列出了兔抗体类型,亚型,基因名称及导向NCBI和IMGT基因数据库的链接。

抗体类型亚型NCBI登录号IMGT 基因名
IgAIgA1, IgA2, IgA3, IgA4, IgA5, IgA6, IgA7, IgA8, IgA9, IgA10, IgA11, IgA12, IgA13, IgA14只以IgA1为例说明。 X51647IGHA
IgE AY386696IGHE
IgG L29172IGHG
IgM J00666IGHM
表一: 兔抗体类型、亚型及相应基因。
兔抗体分子量

不同类型及不同亚型的抗体具有不同的分子量,因为 1) 链间二硫键的数目不同, 2) 链间二硫键引起的免疫球蛋白分子的寡聚化程度不同, 3) 重链区的免疫球蛋白域的数目不同。 关于抗体分子量的更多信息,请参考来邦网Labome文章 小鼠抗体

常见的兔IgG型的在非还原条件下分子量为150 KD,含有两个重链(各约50 KD) 和两个轻链(各约25 KD)。在还原条件下, 重链和轻链的分子量分别为50和25kD。

兔抗体的制备
兔多克隆抗体的制备

兔是多克隆抗体制备中主要的动物宿主, 因为兔子个头小,繁殖周期短, 与大部分研究用模式生物有较大的种间距, 以及有非常成熟的抗体制备工艺。 截止2014年12月10日, Labome抗体库汇集的308060兔多克隆抗体,分别靶向18302个人基因, 13199个小鼠基因, 及10923个大鼠基因。 重塑品牌的商业做法在抗体供应商中非常普遍(即,不同的供应商为同样的抗体试剂使用不同的产品目录号)。 来邦网是唯一的一家努力减少重塑品牌的抗体试剂数量的平台。

兔单克隆抗体的制备

在过去的几十年里,人们一直在努力制备兔单克隆抗体。 对于在啮齿动物中没有免疫原性的抗原来说,这种方法是特别重要的。 最初是通过c-myc和v-abl的转基因兔子产生浆细胞瘤细胞系,进而得到兔单克隆抗体 [1] 。 目前一些公司主要是利用专利技术生产兔单抗。 截止2012年12月10日, Labome抗体库汇集的18692兔单克隆抗体, 分别靶向3112个人基因, 2149个小鼠基因, 及1814个大鼠基因。

兔单抗和小鼠单抗的优劣对比

已有数个研究来比较兔单抗(RabMAb)和小鼠单抗的特点。 2005年, Sabrina Rossi等发表了一组比较研究,以多种肿瘤组织和正常组织为实验材料,检测常规的免疫组化诊断中雌激素受体, 孕激素受体, Ki-67, cyclin D1, CD3, CD5, CD23, 和synaptophysin的兔单抗和小鼠单抗的染色情况。 结果表明,和小鼠单抗相比,兔单抗具有相似的特异性,且具有较高的灵敏度,这允许兔单抗有较高的稀释比(平均5到10倍);此外,一些情况下,为了达到更好的染色效果,也不需要抗原修复操作 [2] 。 2008年,Rafael Rocha et al.的研究也支持这一结论 [3] 。 但是,Jose G. Vilches-Moure 和 Jose A. Ramos-Vara 以甲醛固定,石蜡包埋的犬组织为实验材料,发现兔单抗和小鼠单抗都识别COX-2, Ki67, synaptophysin, 和vimentin;但是,只有兔单抗能检测出CD3, chromogranin A, 和孕激素受体, 而只有小鼠单抗能检测出CD79a, calcitonin, 和雌激素受体 [4] 。

抗兔的二抗

Labome的调查 二抗表明,山羊、绵羊和驴都是制备抗兔二抗的常用宿主。 请查阅 抗兔二抗

抗兔基因的抗体

虽不像啮齿动物那样常用,兔也是一种非常有研究价值的动物。 兔子是研究肿瘤发生 [5], 损伤和创伤修复 [6-10], 及其它一些应用的很好的模式生物。

兔网织红细胞裂解液常用于体外无细胞翻译体系 [11] 。 截止2012年12月10日,Labome抗体库汇集了靶向38个兔基因的单抗,36个兔基因的多抗。 您可以在Labome网站查询和比较这些抗体, 比如, 靶向 兔LDHA, 兔ALDOA, 兔CD4, 兔NHE-3, 和 兔GAPDH的抗体。

参考文献
  1. Spieker-Polet H, Sethupathi P, Yam P, Knight K. Rabbit monoclonal antibodies: generating a fusion partner to produce rabbit-rabbit hybridomas. Proc Natl Acad Sci U S A. 1995;92:9348-52 pubmed
  2. Rossi S, Laurino L, Furlanetto A, Chinellato S, Orvieto E, Canal F, et al. Rabbit monoclonal antibodies: a comparative study between a novel category of immunoreagents and the corresponding mouse monoclonal antibodies. Am J Clin Pathol. 2005;124:295-302 pubmed
  3. Rocha R, Nunes C, Rocha G, Oliveira F, Sanches F, Gobbi H. Rabbit monoclonal antibodies show higher sensitivity than mouse monoclonals for estrogen and progesterone receptor evaluation in breast cancer by immunohistochemistry. Pathol Res Pract. 2008;204:655-62 pubmed publisher
  4. Vilches-Moure J, Ramos-Vara J. Comparison of rabbit monoclonal and mouse monoclonal antibodies in immunohistochemistry in canine tissues. J Vet Diagn Invest. 2005;17:346-50 pubmed
  5. Liu Y, Ren W, Liu C, Huang K, Feng Y, Wang X, et al. Contrast-enhanced ultrasonography of the rabbit VX2 tumor model: Analysis of vascular pathology. Oncol Lett. 2012;4:685-690 pubmed
  6. Lee D, Ku S, Cho H, Kim J, Hiep T, Han S, et al. Effects of Noscarna™ on hypertrophic scarring in the rabbit ear model: histopathological aspects. Arch Pharm Res. 2012;35:1999-2006 pubmed publisher
  7. Dai Y, Chen J, Li H, Li S, Chen J, Ding Y, et al. Characterizing the effects of VPA, VC and RCCS on rabbit keratocytes onto decellularized bovine cornea. PLoS ONE. 2012;7:e50114 pubmed publisher
  8. Moriya T, Zhao C, Cha S, Schmelzer J, Low P, An K, et al. Tendon injury produces changes in SSCT and nerve physiology similar to carpal tunnel syndrome in an in vivo rabbit model. Hand (N Y). 2011;6:399-407 pubmed publisher
  9. Kaku S, Uemura T, Saitoh M, Suzuki K, Iwatsuki Y, Funatsu T, et al. Antithrombotic and anticoagulant effects of direct factor Xa inhibitor darexaban in rat and rabbit models of venous thrombosis. Eur J Pharmacol. 2013;699:40-7 pubmed publisher
  10. Liu F, Zhu Z, Li P, He Y. Creation of a female rabbit model for intrauterine adhesions using mechanical and infectious injury. J Surg Res. 2013;183:296-303 pubmed publisher
  11. Douthwaite J. Eukaryotic ribosome display selection using rabbit reticulocyte lysate. Methods Mol Biol. 2012;805:45-57 pubmed publisher
ISSN : 2329-5147